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高通量DSF分析儀可以分為兩類:染料法和無標記法

更新時間:2025-03-03      點擊次數:658
  高通量DSF分析儀在生物藥物研究、蛋白質穩定性分析等領域有著廣泛的應用,DSF,即差示掃描熒光法(Differential Scanning Fluorimetry),是一種基于蛋白質熱變性過程的熒光檢測方法。它通過在熒光定量PCR儀上緩慢加熱樣品,并在加熱過程中檢測熒光信號的變化來評價蛋白質的熱穩定性。根據熒光信號來源的不同,DSF可以分為兩類:染料法和無標記法(Nano DSF)。
 
  染料法:常用的熒光染料是SYPRO Orange。這是一種環境敏感的疏水染料,當溫度升高時,蛋白去折疊,疏水部分暴露出來,染料與蛋白質的疏水部分特異性結合,導致熒光增強。通過監測熒光強度的變化,可以計算出蛋白質的熔解溫度(Tm)。
 
  無標記法(Nano DSF):這種方法基于蛋白去折疊過程中色氨酸發射光譜的位移進行檢測。色氨酸殘基在蛋白質疏水內核中時,其內源熒光發射波長較短;而當蛋白質去折疊,色氨酸暴露于親水環境時,其內源熒光發射波長會發生紅移。通過監測這種熒光變化,可以在非標記環境下評估蛋白質的熱穩定性。
 
  高通量DSF分析儀結合了DSF技術的優勢,并實現了高通量分析。其主要特點包括:
 
  高通量:采用標準的384微孔板,一次實驗可以分析多個樣品,大大提高了分析效率。
 
  快速分析:一個升溫過程(如60-80分鐘)內即可完成384個樣品的穩定性分析與篩選。
 
  無需特殊耗材:使用標準的384孔板,無需特殊的耗材和毛細管,降低了實驗成本。
 
  內源熒光檢測:Nano DSF方法無需對待測樣品進行任何標記,也無需使用任何熒光探針,即可快速測量整塊樣品微孔板。
 
  高通量DSF分析儀在多個領域都有廣泛的應用,包括但不限于:
 
  蛋白質穩定性分析:評估蛋白質在不同條件下的穩定性,如溫度、pH值、離子強度等。這對于理解蛋白質的結構與功能關系、優化蛋白質藥物的生產和儲存條件具有重要意義。
 
  藥物篩選:通過高通量篩選技術,快速篩選出與靶蛋白結合的候選藥物。這有助于加速藥物研發進程,提高藥物篩選的效率和準確性。
 
  蛋白質結構研究:研究蛋白質的結構和構象變化,為蛋白質結晶等研究提供有力支持。DSF技術可以揭示蛋白質在不同條件下的結構變化,為理解蛋白質的功能和機制提供重要線索。
高通量DSF分析儀
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